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BDP FL 神經酰胺：
將 50 μg BDP FL 神經酰胺溶解在 87.2 μL DMSO 中，以獲得 1 mM 儲備溶液。
將 250 μg BDP FL 神經酰胺溶解在 436 μL DMSO 中，以獲得 1 mM 儲備溶液。
BDP TMR 神經酰胺：
將 50 μg BDP TMR 神經酰胺溶解在 73.6 μL DMSO 中，以獲得 1 mM 儲備溶液。
將 250 μg BDP TMR 神經酰胺溶解在 368 μL DMSO 中，以獲得 1 mM 儲備溶液。
BDP TR 神經酰胺：
將 50 μg BDP TR 神經酰胺溶解在 70.8 μL DMSO 中，以獲得 1 mM 儲備溶液。
將 250 μg BDP TR 神經酰胺溶解在 354 μL DMSO 中，以獲得 1 mM 儲備溶液。
將儲備溶液儲存在-20°C或-80°C避光條件下。避免反復凍融循環。
將 10 mL 的 Hanks 緩沖鹽溶液與 10 mM HEPES (HBSS/HEPES)、pH 7.4 測量到 50 mL 塑料管中。其他無血清平衡鹽溶液，例如 PBS，也適用于此目的。
（可選）將 1 mM Ca 2+和 0.5 mM Mg 2+添加到緩沖溶液中，以防止活細胞聚集并從玻璃上分離。
在裝有緩沖液的試管中添加 3.4 mg (0.34 mg/mL) 脫脂 BSA。
添加 200 µL 1 mM 神經酰胺庫存溶液，以獲得 5 µM 神經酰胺/5 µM BSA 工作溶液。神經酰胺的稀釋取決于細胞類型和密度，應通過實驗確定。
所得神經酰胺/BSA復合物溶液可在-20°C下儲存在塑料瓶中。
在無菌蓋玻片上培養細胞。貼壁細胞可以直接在蓋玻片上染色。
從蓋玻片中吸出介質。
用適當的介質（例如 HBSS/HEPES）沖洗細胞。
將細胞與 5 µM 神經酰胺/BSA 溶液在 4°C 下孵育 30 分鐘。
用冰冷的培養基沖洗細胞幾次。
用脫脂 BSA (0.34 mg/ml) 的 HBSS/HEPES 溶液在室溫下沖洗細胞四次，持續 30 分鐘。
將細胞在新鮮培養基中于 37°C 進一步孵育 30 分鐘。
用新鮮培養基沖洗細胞。
（可選）染色細胞可在 4% 甲醛中于 4 °C 固定 2 分鐘。在 PBS 中清洗固定細胞兩次。
對于熒光顯微鏡，將帶有染色細胞的蓋玻片翻轉到載玻片上，將它們放置在載玻片和蓋玻片之間。
4°C 下將細胞固定在 4% 甲醛中 5 分鐘。
固定細胞用 PBS 清洗兩次，每次 5 分鐘。
將細胞與 PBS 中的 5 µM 神經酰胺/BSA 在 4°C 下孵育 30 分鐘。
用脫脂 BSA (0.34 mg/ml) 的 PBS 溶液在室溫下沖洗細胞四次，持續 30 分鐘。
在 PBS 中沖洗細胞兩次。
對于熒光顯微鏡，使用封固劑將細胞封固在蓋玻片下 。
| 最大吸收* | 最大排放量* | |
|---|---|---|
| BDP FL | 503納米 | 509 納米** |
| BDPTMR | 542納米 | 574納米 |
| BDPTR | 589納米 | 616納米 |
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