二級(jí)抗體用于幾種免疫分析中，以檢測(cè)一級(jí)抗體的存在。這些抗體與酶、生物分子或熒光染料結(jié)合，以檢測(cè)一抗。與一級(jí)抗體不同，二級(jí)抗體是針對(duì)一級(jí)抗體的種類和同種型產(chǎn)生的，通過(guò)在多個(gè)位置與一級(jí)抗體結(jié)合來(lái)檢測(cè)一級(jí)抗體。
為了成功選擇您的第二抗體，您應(yīng)該考慮以下因素:
確保匹配良好–宿主物種是產(chǎn)生第二抗體的動(dòng)物，應(yīng)始終與第一抗體的宿主不同。例如，如果您使用在兔子中產(chǎn)生的一抗，您將需要在不同于兔子的物種（如山羊、驢或小鼠）中產(chǎn)生的抗兔二抗（圖1）。
完整抗體還是片段？–實(shí)際上，真正的問(wèn)題應(yīng)該是“您的主要抗體是單克隆抗體還是多克隆抗體？"這兩個(gè)問(wèn)題的答案通常取決于應(yīng)用程序。單克隆一抗包含單一同種型的免疫球蛋白。因此，使用特異性識(shí)別同種型的二抗至關(guān)重要。此外，單克隆動(dòng)物通常飼養(yǎng)在小鼠、兔和大鼠中。因此，如果主要單克隆抗體是小鼠IgG1，您將需要抗小鼠IgG或特異性較低的F（ab）片段抗小鼠IgG。抗體片段適合用于免疫組織化學(xué)和免疫熒光，因?yàn)樗鼈兊捏w積較小，能夠穿透組織。然而，較小的大小可能會(huì)限制與片段結(jié)合的染料或酶的選擇，導(dǎo)致二抗可能不如全抗體敏感。
多克隆一抗包含幾種同種型免疫球蛋白g的混合物。因此，為了最大限度地檢測(cè)目標(biāo)，最好使用能識(shí)別所有同種型的二抗。多克隆抗體通常以全抗體形式（重鏈+輕鏈）飼養(yǎng)在兔、山羊、綿羊和驢中，因此第二宿主物種必須用來(lái)自不同物種的IgG池進(jìn)行免疫，從而使純化的第二抗體能夠識(shí)別所有形式。例如，如果初級(jí)多克隆抗體是山羊IgG，您將需要抗山羊IgG（H+L）。然而，全抗體可能導(dǎo)致高背景和較低的特異性，因?yàn)樗忻庖咔虻鞍坠蚕磔p鏈，這增加了交叉反應(yīng)性（圖2）。
根據(jù)您的應(yīng)用選擇共軛物-這取決于第二抗體如何檢測(cè)信號(hào)。例如，免疫組織化學(xué)、ELISA和蛋白質(zhì)印跡應(yīng)用使用基于生物素標(biāo)記的比色和化學(xué)發(fā)光檢測(cè)來(lái)放大信號(hào)和提高靈敏度，以及與辣根過(guò)氧化物酶（HRP）或堿性磷酸酶（AP）作用的酶反應(yīng)。然而，對(duì)于免疫標(biāo)記、熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀實(shí)驗(yàn)，使用熒光染料如Alexa Fluor檢測(cè)信號(hào)，這些熒光染料直接與抗體結(jié)合以放大信號(hào)和靈敏度。
親和純化抗體與交叉吸附抗體–該步驟用于提高抗體的特異性，并可在親和純化和交叉吸附中進(jìn)行區(qū)分。大多數(shù)二抗通過(guò)親和層析純化，產(chǎn)生高親和力抗體。這種抗體通常在IHC使用，因?yàn)樗鼈儺a(chǎn)生最小的非特異性結(jié)合，也用于蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)低豐度蛋白。交叉吸附的第二抗體通常經(jīng)過(guò)額外的純化步驟，以過(guò)濾掉與非靶免疫球蛋白種類結(jié)合的成員。這一步驟增加了它們的特異性并減少了非特異性背景。這些抗體是為免疫組織化學(xué)等特殊應(yīng)用而設(shè)計(jì)的。
總之，二級(jí)抗體的選擇取決于手頭的應(yīng)用和目標(biāo)豐度所需的靈敏度和純化水平以及非特異性結(jié)合的風(fēng)險(xiǎn)。
BMA是BMA Biomedicals的縮寫(xiě)，是一家位于瑞士北部巴塞爾地區(qū)的小型生物技術(shù)公司。
由一群免疫學(xué)家、生物化學(xué)家和生物學(xué)家于1989年創(chuàng)建，其主要活動(dòng)領(lǐng)域是抗體的開(kāi)發(fā)、生產(chǎn)和營(yíng)銷。2005年，BMA被Chemoforma Inc .收購(gòu)，chemo forma Inc .是一家長(zhǎng)期活躍于免疫支持飼料添加劑生產(chǎn)領(lǐng)域的商業(yè)合作伙伴。2013年，Chemoforma Inc .收購(gòu)了總部位于加州的半島實(shí)驗(yàn)室國(guó)際公司，該公司專門(mén)從事抗肽抗體和放射免疫分析。
BMA的主要專長(zhǎng)在于抗體在免疫組織化學(xué)和酶免疫分析（ELISAs）中的應(yīng)用。生產(chǎn)已適應(yīng)無(wú)胎牛血清的培養(yǎng)基。這不僅是對(duì)可持續(xù)發(fā)展和動(dòng)物福利的重要貢獻(xiàn)，而且產(chǎn)品不含污染性牛抗體。它們通常僅供體外研究使用，但支持將適當(dāng)?shù)漠a(chǎn)品授權(quán)給診斷領(lǐng)域的公司。
BMA經(jīng)營(yíng)自己的設(shè)施，擁有先進(jìn)的分析和生產(chǎn)基礎(chǔ)設(shè)施。我們的技術(shù)訣竅在于單克隆和多克隆抗體的生產(chǎn)和衍生，以及它們?cè)诿庖邔W(xué)技術(shù)中的應(yīng)用。BMA還許可外部組織的產(chǎn)品。這些產(chǎn)品可能處于早期開(kāi)發(fā)階段，最終將由公司進(jìn)行生產(chǎn)更新。
BMA的產(chǎn)品范圍以客戶為導(dǎo)向，包括許多專注于有限或?qū)I(yè)應(yīng)用的產(chǎn)品。有些是由BMA自己生產(chǎn)的，有些是有大量出版記錄的常規(guī)產(chǎn)品。
BMA的產(chǎn)品重點(diǎn)包括以下領(lǐng)域
- 炎癥和傳染病
- 止血
- 腫瘤相關(guān)疾病
- 獸醫(yī)試劑，特別是抗豬組織的抗體
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