如何改善組織學(xué)切片中的核染色？
更新時(shí)間：2024-08-15 點(diǎn)擊次數(shù)：1295
希望改善組織切片中的細(xì)胞核染色？我們可以幫忙！組織學(xué)標(biāo)本通常需要細(xì)胞核和組織的其他細(xì)胞成分之間的明顯區(qū)別，以給病理學(xué)家提供最佳的診斷外觀。蘇木精一種堿性染料，將細(xì)胞核染色，使其呈現(xiàn)藍(lán)色到紫色。曙紅將粉紅色調(diào)添加到細(xì)胞質(zhì)中，將紅色調(diào)添加到血細(xì)胞中，從而產(chǎn)生對(duì)比鮮明的藍(lán)紫色和粉紅色陰影，這在標(biāo)本的細(xì)胞結(jié)構(gòu)中是截然不同的。
對(duì)于使用組織學(xué)標(biāo)本的常規(guī)診斷，使用蘇木精和伊紅(H&E)染色是目前觀察細(xì)胞結(jié)構(gòu)細(xì)節(jié)的方法。因?yàn)檫@種染色顯示了如此廣泛的細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核和細(xì)胞外基質(zhì)特征，實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員能夠控制嗜堿性染色的外觀和強(qiáng)度，以滿足病理學(xué)家的期望。主要有兩種類型:Harris H&E，一種回歸技術(shù)，和Gill的H&E，一種漸進(jìn)技術(shù)。這篇文章討論了如何改善每種技術(shù)的嗜堿性核染色。
Harris H&E染色:嗜堿性染色太弱
哈里斯蘇木精是一種回歸染色技術(shù)，因此組織切片首先用蘇木精過(guò)度染色以產(chǎn)生藍(lán)色細(xì)胞核，然后在分化步驟中在弱酸酒精中去除多余的染料。
當(dāng)蘇木精的顏色太弱或標(biāo)本暴露在蘇木精中的時(shí)間不夠長(zhǎng)時(shí)，H&E染色中的弱嗜堿性核染色就會(huì)發(fā)生。以下是我們推薦的解決方案:
蘇木精中的暴露時(shí)間太有限:
為了解決曝光時(shí)間，調(diào)整載玻片在蘇木精染色溶液中的時(shí)間長(zhǎng)度，直到您看到所需的染色強(qiáng)度。蘇木精的pH值超出范圍:
為了解決蘇木精被稀釋超過(guò)pH值5-6的理想范圍的問(wèn)題，在染色過(guò)程中盡量減少水分帶入蘇木精溶液。水的pH值超出范圍:
染色前檢查水的pH值，如果可能，用去離子水或蒸餾水代替自來(lái)水。這可以解決水中含有太多氯的問(wèn)題，氯可以作為漂白劑；減弱蘇木精染色。弱溶液滲透:
對(duì)于石蠟包埋標(biāo)本上的H&E染色，如果嗜堿性染色太淺，有可能石蠟沒(méi)有全從組織切片中溶解出來(lái)。如果組織切片中有蠟，水基染色液不能適當(dāng)滲透標(biāo)本，導(dǎo)致染色弱。將載玻片放回新鮮二甲苯中，去除切片中的石蠟，然后繼續(xù)對(duì)組織標(biāo)本進(jìn)行重新染色。不良固定或組織處理:
弱嗜堿性染色的另一個(gè)原因是不良的固定或處理。這意味著染色劑不會(huì)與組織結(jié)合；這是準(zhǔn)備紙巾的問(wèn)題。酸性酒精濃度過(guò)高:
如果酸性醇的濃度對(duì)于分化步驟來(lái)說(shuō)太強(qiáng)，或者如果樣本在酸性醇中花費(fèi)了太多時(shí)間，這種回歸染色技術(shù)可能導(dǎo)致太多的染料被去除。通過(guò)選擇較低濃度的酸性酒精溶液(即從1%變?yōu)?.5%溶液)或減少樣品在溶液中的時(shí)間來(lái)解決這一問(wèn)題。
Gill’s H&E染色:嗜堿性染色太弱
吉爾蘇木精是一種進(jìn)行性染色。將染色劑施用于組織切片，而不需要在區(qū)分劑(通常為酸性醇)中進(jìn)行后續(xù)步驟，以去除過(guò)量的嗜堿性染色劑。
- 蘇木精中的曝光時(shí)間太有限:要解決曝光時(shí)間，調(diào)整載玻片在蘇木精染色中的時(shí)間長(zhǎng)度，直到您看到所需的染色強(qiáng)度。
- 蘇木精的pH值超出范圍:為了解決蘇木精被稀釋超過(guò)pH值5-6的理想范圍的問(wèn)題，在染色過(guò)程中，盡量減少水分帶入蘇木精溶液。
- 水的pH值超出范圍:在染色前檢查水的pH值，如果可能，用去離子水或蒸餾水代替自來(lái)水。這可以解決水中含有太多氯的問(wèn)題，氯可以作為漂白劑，可以減弱蘇木精染色。
- 弱溶液滲透:對(duì)于石蠟包埋標(biāo)本上的H&E染色，如果嗜堿性染色太淺，有可能石蠟沒(méi)有全從組織切片中溶解出來(lái)。如果組織切片中有蠟，水基染色液不能適當(dāng)滲透標(biāo)本，導(dǎo)致染色弱。將載玻片放回新鮮的二甲苯中，去除切片中的石蠟，然后繼續(xù)對(duì)組織標(biāo)本進(jìn)行重新染色。
- 固定或處理不良:弱嗜堿性染色的另一個(gè)原因是固定或處理不良。這意味著染色劑不會(huì)與組織結(jié)合；這是準(zhǔn)備紙巾的問(wèn)題。
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