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qPCR 探針的多種不同填料為科學(xué)家在檢測開發(fā)過程中提供了豐富的選擇。鎖定核酸 （LNA）、小溝結(jié)合物 （MGB） 和 BHQplus™ 探針均可增強(qiáng)雙鏈體穩(wěn)定性，這有助于您的檢測獲得高信噪比，同時(shí)保持寡核苷酸長度相當(dāng)緊湊。它們還能夠更好地適應(yīng)具有挑戰(zhàn)性的靶標(biāo)，如富含 A-T 的序列。但每種探針類型的化學(xué)性質(zhì)意味著您將獲得最佳的檢測性能 – 信噪比、檢測限 （LOD） 等。– 當(dāng)您將探頭類型與應(yīng)用程序匹配時(shí)。
MGB 探針適用于檢測 SNP 和困難的基因表達(dá)靶標(biāo)
MGB 探針的長度通常為 8-30 個(gè)堿基，5' 端有一個(gè)熒光團(tuán)，3' 端有一個(gè)淬滅基團(tuán)。3' 末端也連接到一個(gè)化學(xué)部分 - MGB - 該化學(xué)部分與雙鏈 DNA 的小溝非共價(jià)結(jié)合。
由于 MGB 附著在寡核苷酸的末端，因此易于設(shè)計(jì) - 只需使用與目標(biāo)區(qū)域互補(bǔ)的寡核苷酸序列即可。這使得 MGB 探針成為檢測 SNP 和困難的基因表達(dá)靶標(biāo)（例如富含 A-T 含量的序列）的理想選擇。
然而，雖然設(shè)計(jì)可能很簡單，但熔融溫度 （Tm） 無法進(jìn)行微調(diào)。
LNA，也稱為橋式核酸，是經(jīng)過修飾的堿基，其中糖的 2' 氧和 4' 碳與亞甲基橋共價(jià)連接。
含有 LNA 的探針如何工作？當(dāng)使用一個(gè)或多個(gè) LNA 代替未修飾的單體時(shí)，探針-靶標(biāo)雙鏈體的穩(wěn)定性得到增強(qiáng)。 雙工穩(wěn)定化的量取決于許多因素，包括使用的 LNA 數(shù)量以及 LNA 在探針中的位置。因此，您可以微調(diào) LNA 探針的設(shè)計(jì)，以達(dá)到所需的特異性和穩(wěn)定性水平。
LNA 探針適合哪些應(yīng)用？什么時(shí)候應(yīng)該使用 LNA 探頭？雖然設(shè)計(jì)比 MGB 探頭稍微復(fù)雜一些，并且需要迭代測試以微調(diào)性能和 Tm，LNA 探針可以提供更好的特異性和對(duì)非靶序列的區(qū)分度。 它們非常適合需要高特異性的應(yīng)用。
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對(duì)用于 SYBR Green 檢測的 LNA 增強(qiáng)引物感興趣？除了提供 LNA 探針外，Biosearch Technologies 還合成具有內(nèi)部 LNA 修飾的定制寡核苷酸。
與 LNA 探針一樣，BHQplus 探針利用化學(xué)修飾的單體來增強(qiáng)探針-靶標(biāo)雙鏈體的穩(wěn)定性和特異性。
然而，BHQplus 探針中使用的專有化學(xué)成分與 LNA 不同，這為科學(xué)家提供了另一種探針化學(xué)選擇。
與 LNA 探針一樣，BHQplus 探針非常適合需要高靈敏度和特異性的應(yīng)用。它們?yōu)?LNA 探頭技術(shù)提供了一種更易于設(shè)計(jì)且價(jià)格更具競爭力的替代方案，當(dāng)您不需要微調(diào)探頭性能時(shí)，它是一個(gè)不錯(cuò)的選擇。
雖然我們已經(jīng)強(qiáng)調(diào)了使每種探針化學(xué)成分大放異彩的具體優(yōu)勢(shì)，但其中有很多重疊，您可能希望在檢測開發(fā)過程中試用每種類型的探針。
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