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測(cè)量蛋白質(zhì)的紫外光吸收是微量蛋白質(zhì)濃度和純度分析最直接的方法。芳香族氨基酸和許多蛋白質(zhì)的殘基表現(xiàn)出很強(qiáng)的紫外線吸收，在 280nm 處達(dá)到峰值。吸收的光量與樣品的濃度成正比。使用 Beer-Lambert 方程，可以將蛋白質(zhì)量化為這種吸收行為的一個(gè)因素。
直接 UV 吸光度測(cè)量是一種簡(jiǎn)單有效的純化蛋白質(zhì)方法，但它們并不是通用的定量方法。相反，分光光度法技術(shù)必須根據(jù)對(duì)分析物的理解以及樣品中是否存在可能干擾 280nm 直接定量的緩沖液或溶劑進(jìn)行定制。
本文將探討用于蛋白質(zhì)微量分析和生物化學(xué)應(yīng)用的四種替代蛋白質(zhì)定量分析。
BCA 或 Smith 測(cè)定法是一種比色測(cè)定法，專(zhuān)為分析溶液中的蛋白質(zhì)樣品而設(shè)計(jì)。在分光光度法分析之前，蛋白質(zhì)與銅離子結(jié)合形成銅-二辛可寧酸 （Cu-BCA） 螯合物;一種紫色復(fù)合物，在色度強(qiáng)度和蛋白質(zhì)濃度之間具有線性相關(guān)性。這種復(fù)合物可吸收 562nm 的光，并與去污劑兼容。
Bradford 分析是用于微量分析的相對(duì)成熟的比色蛋白質(zhì)定量工具之一。它基于帶正電荷的蛋白質(zhì)與帶負(fù)電荷的考馬斯染料的結(jié)合。該復(fù)合物吸收 595nm 的光。然后可以將吸光度光譜與標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較，以確定蛋白質(zhì)濃度。
改良的 Lowry 分析是一種銅基試劑，可在 650nm 波長(zhǎng)下測(cè)量銅-蛋白質(zhì)復(fù)合物的吸光度。與 Bradford 測(cè)定一樣，必須通過(guò)與測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較來(lái)估計(jì)結(jié)果。
Pierce 660 分析設(shè)計(jì)用于對(duì)與染料-金屬?gòu)?fù)合物結(jié)合的蛋白質(zhì)進(jìn)行微量分析。它與包含去污劑和還原劑的溶液兼容，在 660nm 的波長(zhǎng)處表現(xiàn)出吸收。
DS-11 系列分光光度計(jì)可在整個(gè)紫外-可見(jiàn)光譜范圍內(nèi)進(jìn)行吸光度測(cè)量，使用 280nm 吸光度和市場(chǎng)上最常見(jiàn)的比色分析方法進(jìn)行直接定量，能夠?qū)Φ鞍踪|(zhì)樣品進(jìn)行微量分析。標(biāo)準(zhǔn)曲線功能增強(qiáng)了這一點(diǎn)，該功能繪制 2 – 8 條標(biāo)準(zhǔn)曲線，用于吸光度值的快速比較分析。DS-11 特別適用于定量低至 1 μL （μl） 樣品體積的 BSA、IgG 和定制蛋白質(zhì)，并全面實(shí)施上述蛋白質(zhì)檢測(cè)。
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