聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction, PCR)是分子生物學(xué)中基礎(chǔ)且廣泛應(yīng)用的技術(shù)之一,用于特異性擴(kuò)增目標(biāo)DNA片段。盡管PCR儀和試劑是核心要素,但實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行同樣高度依賴一系列專(zhuān)用耗材。這些
pcr耗材不僅影響反應(yīng)效率和特異性,還直接關(guān)系到實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性、防污染能力及數(shù)據(jù)可靠性。根據(jù)PCR實(shí)驗(yàn)流程,主要耗材可分為以下幾類(lèi):
一、反應(yīng)容器類(lèi)
1. PCR管(單管)
通常為0.2 mL或0.5 mL容量的薄壁塑料管,材質(zhì)多為高純度聚丙烯(PP),具有良好的熱傳導(dǎo)性和耐高溫性能。常見(jiàn)有平蓋、凸蓋或帶O型圈密封設(shè)計(jì),適用于普通PCR或?qū)γ芊庑砸筝^高的實(shí)驗(yàn)。
2. PCR八聯(lián)管
由8個(gè)相連的PCR管組成,可整排使用或按需剪開(kāi),便于批量加樣和在PCR儀中整齊排列。配套的光學(xué)平蓋或圓蓋需與儀器適配,尤其在實(shí)時(shí)熒光定量PCR中,平蓋可確保光路通透。
3. PCR板(96孔板、384孔板)
用于高通量PCR或qPCR實(shí)驗(yàn)。96孔板較為常用,材質(zhì)透明或白色。部分板型帶有裙邊,以匹配不同型號(hào)的PCR儀和自動(dòng)化工作站。
二、封板與密封材料
1. PCR管蓋/八聯(lián)管蓋
與管體配套,確保熱循環(huán)過(guò)程中不蒸發(fā)、不泄漏。qPCR須使用光學(xué)透明蓋,以允許激發(fā)光穿透并檢測(cè)熒光信號(hào)。
2. 封板膜
用于PCR板的密封,包括:
粘性封板膜:手動(dòng)按壓貼合,適用于普通PCR;
熱封膜:需用熱封儀密封,密封性更強(qiáng),適合長(zhǎng)時(shí)間反應(yīng)或運(yùn)輸;
光學(xué)透明膜:專(zhuān)用于qPCR,具備高透光率和低自發(fā)熒光。
三、移液與加樣耗材
1. 微量移液器吸頭(Tip)
通常為10 μL、200 μL、1000 μL規(guī)格,要求無(wú)DNA酶、RNA酶、無(wú)熱原。為防止氣溶膠污染,推薦使用帶濾芯吸頭,尤其在模板加樣和陽(yáng)性對(duì)照操作中。
2. 低吸附吸頭
內(nèi)壁經(jīng)特殊處理,減少核酸或蛋白在吸頭內(nèi)壁的殘留,適用于低濃度模板的精準(zhǔn)轉(zhuǎn)移。

四、輔助與前處理耗材
1. 離心管(1.5 mL/2.0 mL EP管)
用于試劑分裝、模板稀釋或反應(yīng)體系預(yù)混。同樣需為無(wú)酶、無(wú)污染級(jí)別。
2. 磁力架與磁珠管
在基于磁珠的核酸提取后直接用于PCR模板制備,部分實(shí)驗(yàn)采用“提取-擴(kuò)增”一體化流程,此時(shí)磁珠管也屬于廣義PCR耗材。
3. 冰盒或冷卻模塊
雖非一次性耗材,但在配制反應(yīng)體系時(shí)用于保持酶和模板低溫,避免提前啟動(dòng)反應(yīng)。
五、防污染與質(zhì)量控制用品
1. 陰性對(duì)照與陽(yáng)性對(duì)照管
雖屬試劑范疇,但常與專(zhuān)用PCR管配套使用,作為實(shí)驗(yàn)質(zhì)控的一部分。
2. 工作區(qū)隔離用品
如一次性實(shí)驗(yàn)服、手套、口罩、PCR專(zhuān)用工作臺(tái)面墊等,雖不直接參與反應(yīng),但對(duì)防止外源DNA污染至關(guān)重要。
六、特殊應(yīng)用耗材
1. 數(shù)字PCR(dPCR)芯片或微滴生成管
用于dPCR平臺(tái),如微流控芯片、油包水微滴反應(yīng)管等,屬于高精度專(zhuān)用耗材。
2. RT-PCR專(zhuān)用管
部分逆轉(zhuǎn)錄步驟與PCR在同一管中完成,需耐受更寬溫度范圍。
使用注意事項(xiàng)
所有耗材應(yīng)儲(chǔ)存在清潔、干燥環(huán)境中,避免陽(yáng)光直射;
開(kāi)封后建議短期內(nèi)用完,防止吸潮或污染;
不同品牌耗材在尺寸、密封性、光學(xué)性能上可能存在差異,更換品牌時(shí)需驗(yàn)證兼容性;
嚴(yán)禁重復(fù)使用,以防交叉污染和信號(hào)衰減;
廢棄的PCR管、吸頭等應(yīng)按生物安全規(guī)范處理,尤其涉及病原體樣本時(shí)。
結(jié)語(yǔ)
合理選擇、規(guī)范使用并注重pcr耗材細(xì)節(jié)管理,不僅能提高擴(kuò)增效率和數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性,還能有效降低假陽(yáng)性或假陰性風(fēng)險(xiǎn)。在日常實(shí)驗(yàn)中,將耗材質(zhì)量納入整體實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)考量,是實(shí)現(xiàn)可靠、可重復(fù)分子檢測(cè)的重要前提。