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詳細介紹
| 品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現貨 |
|---|---|---|---|
| 應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業,農林牧漁,制藥/生物制藥 |
N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（N-acetyl-β-D-glucosidase, NAG）試劑盒
正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
NAG是溶酶體中的一種酸性水解酶，廣泛存在于各種組織、體液和細胞中，以前列腺和腎近曲小管細胞內含量最高。NAG活性變化與機體某些病理狀態密切相關。
測定原理：
NAG分解β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成對-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通過測定吸光值升高速率來計算NAG活性。
自備用品：
酶標儀/可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、96孔板/微量石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制：
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入2.5mL蒸餾水，充分溶解備用；用不完的試劑仍-20℃保存。
試劑二：液體4mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：液體13mL×1瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
1、細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；15000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。15000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
3、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟：
酶標儀或分光光度計預熱30min以上，調節波長至400nm，蒸餾水調零。
2、樣本測定（在EP管或96孔板中依次加入下列試劑）：
試劑名稱（μL） | 測定管 | 對照管 |
試劑一 | 25 | |
蒸餾水 | 25 | |
試劑二 | 35 | 35 |
樣本 | 10 | 10 |
迅速混勻，放入37℃保溫30min
試劑三 | 130 | 130 |
充分混勻， 400nm處測定吸光值A，計算ΔA=A測定-A對照。每個測定管需設一個對照管。
NAG活性計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、標準條件下測定的回歸方程為y = 0.00585x +0.0083；x為標準品濃度（nmol/mL），y為吸光值。
2、血清（漿）NAG活力的計算
單位的定義：每mL血清（漿）每分鐘產生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
NAG活力(nmol /min/mL)= [(ΔA-0.0083) ÷0.00585×V反總]÷V樣÷T =39.89×(ΔA-0.0083)
3、細胞、細菌和組織中NAG活力的計算
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘產生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
NAG活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA-0.0083) ÷0.00585×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T
=39.89×(ΔA-0.0083) ÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘產生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
NAG活性(nmol/min/g鮮重)= [(ΔA-0.0083) ÷0.00585×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=39.89×(ΔA-0.0083)÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘產生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
NAG活性(nmol/min /104cell) =[(ΔA-0.0083) ÷0.00585×V反總]÷(500×V樣÷V樣總)÷T
=0.08×(ΔA-0.0083)
V反總：反應體系總體積，0.07mL；V樣：加入反應體系中樣本體積，0.01mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g； 500：細胞或細菌總數，500萬；T：反應時間，30min。
b.用96孔板測定的計算公式如下
1、標準條件下測定的回歸方程為y = 0.0039x +0.0083；x為標準品濃度（nmol/mL），y為吸光值。
2、血清（漿）NAG活力的計算
單位的定義：每mL血清（漿）每分鐘產生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
NAG活力(nmol /min/mL)= [(ΔA-0.0083) ÷0.0039×V反總]÷V樣÷T =59.83×(ΔA-0.0083)
3、細胞、細菌和組織中NAG活力的計算
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘產生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
NAG活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA-0.0083) ÷0.0039×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T
=59.83×(ΔA-0.0083) ÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘產生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
NAG活性(nmol/min/g鮮重)= [(ΔA-0.0083) ÷0.0039×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=59.83×(ΔA-0.0083)÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘產生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
NAG活性(nmol/min /104cell) =[(ΔA-0.0083) ÷0.0039×V反總]÷(500×V樣÷V樣總)÷T
=0.12×(ΔA-0.0083)
V反總：反應體系總體積，0.07mL；V樣：加入反應體系中樣本體積，0.01mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g； 500：細胞或細菌總數，500萬；T：反應時間，30min。
上海牧榮生物科技有限公司
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