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詳細介紹
| 品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現貨 |
|---|---|---|---|
| 應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業,農林牧漁,制藥/生物制藥 |
β半乳糖苷酶（βGAL）測試盒
正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
β-GAL(EC 3.2.1.23)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，能夠催化β半乳糖苷化合物中β半乳糖苷鍵水解，此外還具有轉半乳糖苷的作用。β-GAL不僅可為植物的快速生長釋放儲存的能量，還能在正常的多糖代謝、細胞壁組分代謝以及衰老時細胞壁降解過程中催化多糖、糖蛋白以及半乳糖脂末端半乳糖殘基的水解，釋放自由的半乳糖。
測定原理：
β-GAL分解對-硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷生成對-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通過測定吸光值升高速率來計算β-GAL活性。
自備用品：
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制：
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入2.5mL蒸餾水，充分溶解備用；用不完的試劑仍-20℃保存。
試劑二：液體4mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：液體13mL×1瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
1、細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；15000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。15000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
3、培養液等液體樣本：直接檢測
測定步驟：
分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節波長至400nm，蒸餾水調零。
2、樣本測定（在EP管或96孔板中依次加入下列試劑）：
試劑名稱（μL） | 測定管 | 對照管 |
試劑一 | 25 | |
蒸餾水 | 25 | |
試劑二 | 35 | 35 |
樣本 | 10 | 10 |
迅速混勻，放入37℃保溫30min
試劑三 | 130 | 130 |
充分混勻， 400nm處測定吸光值A，計算ΔA=A測定-A對照。每個測定管需設一個對照管。
β-GAL活性計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準條件下測定的回歸方程為y = 0.00585x -0.0027；x為標準品濃度（nmol/mL），y為吸光值。
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘產生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
β-GAL活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027) ÷0.00585×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T
=39.89×(ΔA+0.0027) ÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘產生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
β-GAL活性(nmol/min/g鮮重)=[(ΔA+0.0027)÷0.00585×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=39.89×(ΔA+0.0027) ÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘產生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
β-GAL活性(nmol/min/104cell) =[(ΔA+0.0027) ÷0.00585×V反總]÷(500×V樣÷V樣總)÷T
=0.08×(ΔA +0.0027)
（4）按液體體積計算：
單位的定義：每mL樣本每分鐘產生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
β-GAL活性(nmol/min/mL)=[(ΔA+0.0027)÷0.00585×V反總]÷V樣÷T
=39.89×(ΔA+0.0027)
V反總：反應體系總體積，0.07mL；V樣：加入反應體系中樣本體積，0.01mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g； 500：細胞或細菌總數，500萬；T：反應時間，30min。
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準條件下測定的回歸方程為y = 0.0039x -0.0027；x為標準品濃度（nmol/mL），y為吸光值。
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘產生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
β-GAL活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027) ÷0.0039×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T
=59.83×(ΔA+0.0027) ÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘產生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
β-GAL活性(nmol/min/g鮮重)=[(ΔA+0.0027)÷0.0039×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=59.83×(ΔA+0.0027) ÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘產生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
β-GAL活性(nmol/min/104cell) =[(ΔA+0.0027) ÷0.0039×V反總]÷(500×V樣÷V樣總)÷T
=0.12×(ΔA +0.0027)
（4）按液體體積計算：
單位的定義：每mL樣本每分鐘產生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
β-GAL活性(nmol/min/mL)=[(ΔA+0.0027)÷0.0039×V反總]÷V樣÷T
=59.83×(ΔA+0.0027)
V反總：反應體系總體積，0.07mL；V樣：加入反應體系中樣本體積，0.01mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g； 500：細胞或細菌總數，500萬；T：反應時間，30min。
上海牧榮生物科技有限公司
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