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詳細介紹
| 品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現貨 |
|---|---|---|---|
| 應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業,農林牧漁,制藥/生物制藥 |
乳酸含量（LA）測試盒
注意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義
乳酸是生物體代謝過程中重要的中間產物，與糖代謝、脂類代謝、蛋白質代謝及細胞內能量代謝密切相關，乳酸含量是評估糖元代謝的和有氧代謝的重要指標。
測定原理
乳酸在乳酸脫氫酶的作用下生成丙酮酸，同時使NAD+還原生成NADH和H+，H+傳遞給PMS生成的PMSH2還原INT生成紅色物質，在530nm處有特征吸收峰。
自備實驗用品及儀器
天平、研缽、離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。
試劑組成和配制
提取液：液體110mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體2mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體5mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×1支，-20℃避光保存。臨用前加入0.6mL蒸餾水充分溶解。
試劑四：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前加6mL蒸餾水充分溶解。
試劑五：粉劑×1支，4℃避光保存。
標準品：液體1mL×1支，4℃保存。
顯色液：臨用前根據用量按照提取液（V）：試劑三（V）：試劑四（V）：試劑五（m）=1（mL)：0.3（mL)：3（mL)：15（mg）的比例充分混勻。（注意：現配現用，用多少配多少，在棕色瓶中配制，試劑盒中帶有4個棕色空瓶）
樣本處理
組織：按照質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于4℃，12000g離心10min，取上清測定。
細胞：按照細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；于4℃，12000g離心10min，取上清測定。
血清：直接測定。
測定操作
樣品對照管 | 樣品測定管 | 標準對照管 | 標準測定管 | |
樣品（μL） | 10 | 10 | ||
標準品（μL） | 10 | 10 | ||
H2O（μL） | 60 | 90 | 60 | 90 |
試劑一（μL） | 30 | 30 | ||
試劑二（μL） | 40 | 40 | 40 | 40 |
顯色液（μL） | 60 | 60 | 60 | 60 |
充分混勻，于37℃反應30min，于微量石英比色皿/96孔板，測定530nm處吸光值，分別記為A1，A2，A3，A4，△A樣=A2-A1；△A標= A4-A3 | ||||
注意：標準對照管和標準測定管只需測定一次，每個樣品測定管設一個樣品對照管
計算公式
1. 按照蛋白含量計算
LA含量（μmol/mg prot）= △A樣÷△A標×C標÷ Cpr
= 2×△A樣÷△A標÷ Cpr
2. 按照樣本質量計算
LA含量（μmol/g 鮮重）= △A樣÷△A標×C標÷ W
= 2×△A樣÷△A標÷ W
按照細胞數量計算
LA含量（μmol/104 cell）= △A樣÷△A標×C標÷ 細胞數量
= 2×△A樣÷△A標÷ 細胞數量
4. 按照液體體積計算
LA含量（μmol/mL）= △A樣÷△A標×C標
= 2×△A樣÷△A標
C標：標準品濃度，2mmol/L；W：樣本質量，g/mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL
注意事項
若吸光值超過2，請進行適當的稀釋后再進行測定，并在計算公式中乘以稀釋倍數。
*低檢出限為1.8μmol/L。
上海牧榮生物科技有限公司
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