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詳細介紹
| 品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現貨 |
|---|---|---|---|
| 應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業,農林牧漁,制藥/生物制藥 |
二氫黃酮醇還原酶（DFR）測試盒
注意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義
二氫黃酮醇還原酶是類黃酮合成途徑中的一個關鍵酶，在決定植物的花色、葉色、果色和其他經濟器官的色澤及其營養品質方面起著重要作用。
測定原理
二氫黃酮醇還原酶作用于二氫槲皮素產生兒茶素，可與香草醛縮合形成紅色化合物，在500nm處有特征吸收峰。
需自備的儀器和用品
研缽、低溫離心機、震蕩儀、氮吹儀、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、水浴鍋、無水乙醇、乙酸乙酯。
試劑組成和配制
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體12mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體1.5mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加2mL蒸餾水溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
試劑四：液體30mL×1瓶，4℃避光保存。
酶液提取
組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。10000g ，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
測定操作表
分光光度計/酶標儀預熱30min，調節波長至500nm。
操作表
對照管 | 測定管 | |||
酶液（μL） | 40 | 40 | ||
試劑一（μL） | 140 | 120 | ||
試劑二（μL） | 20 | |||
試劑三（μL） | 20 | 20 | ||
混勻，30℃反應30min | ||||
乙酸乙酯（μL） | 200 | 200 | ||
37℃震蕩10min，取上層溶液，N2吹干 | ||||
無水乙醇（μL） | 100 | 100 | ||
充分震蕩 | ||||
試劑四(μL) | 300 | 300 | ||
混勻，25℃靜置10min，于微量石英比色皿/96孔板中測定500nm處吸光值A。分別記為A對照管和A測定管，△A=A測定管-A對照管 | ||||
酶活性計算公式
用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線：y=0.0184x+0.0002，R2=0.999
（1）按照蛋白濃度計算
酶活性定義：在30℃，pH7.5條件下，每毫克蛋白每分鐘分解二氫槲皮素產生1mmol兒茶素所需的酶量為一個酶活力單位。
DFR活性（mmol/min/mg prot）=（△A-0.0002）÷0.0184×V反總÷（V樣×Cpr）÷T÷2
= 9.06×（△A-0.0002）÷Cpr
（2）按照樣本質量計算
酶活性定義：在30℃，pH7.5條件下，每克組織每分鐘分解二氫槲皮素產生1mmol兒茶素所需的酶量為一個酶活力單位。
DFR活性（mmol/min/g 鮮重）= （△A-0.0002）÷0.0184×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T÷2
= 9.06×（△A-0.0002）÷W
V反總：反應總體積，1mL；V樣：反應體系中樣本體積，0.1mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W，樣本質量，g；T：反應時間，30min
b．用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線：y=0.0092x+0.0002，R2=0.999
（1）按照蛋白濃度計算
酶活性定義：在30℃，pH7.5條件下，每毫克蛋白每分鐘分解二氫槲皮素產生1mmol兒茶素所需的酶量為一個酶活力單位。
DFR活性（mmol/min/mg prot）=（△A-0.0002）÷0.0092×V反總÷（V樣×Cpr）÷T÷2
= 9.06×（△A-0.0002）÷Cpr
（2）按照樣本質量計算
酶活性定義：在30℃，pH7.5條件下，每克組織每分鐘分解二氫槲皮素產生1mmol兒茶素所需的酶量為一個酶活力單位。
DFR活性（mmol/min/g 鮮重）= （△A-0.0002）÷0.0092×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T÷2
= 9.06×（△A-0.0002）÷W
V反總：反應總體積，1mL；V樣：反應體系中樣本體積，0.1mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W，樣本質量，g；T：反應時間，30min
上海牧榮生物科技有限公司
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