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簡(jiǎn)要描述：雙縮脲法蛋白含量測(cè)試盒 上海牧榮生物科技有限公司專業(yè)實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)品.為客戶全面解決實(shí)驗(yàn)、生產(chǎn)、開(kāi)發(fā)需求,提供方便、快捷的服務(wù)。
產(chǎn)品型號(hào)：廠商性質(zhì)：代理商更新時(shí)間：2024-05-07訪 問(wèn) 量：732相關(guān)文章
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| 品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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| 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥 |
雙縮脲法蛋白含量測(cè)試盒
微量法 100T/96S
注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定，確保蛋白濃度在1～10mg/ml范圍內(nèi)。
測(cè)定意義：
樣品可溶性蛋白質(zhì)含量常常用于酶活性計(jì)算。此外，可溶性蛋白質(zhì)含量也用于食品等質(zhì)量分析。
測(cè)定原理：
強(qiáng)堿性溶液中，雙縮脲與CuSO4形成紫色絡(luò)合物；紫色絡(luò)合物顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比，而與蛋白質(zhì)分子量及氨基酸成分無(wú)關(guān)，故可用來(lái)測(cè)定蛋白質(zhì)含量。該方法測(cè)定范圍為1~10mg蛋白質(zhì)，適用于蛋白質(zhì)濃度高的樣品，尤其是動(dòng)物材料。
自備儀器和用品：
離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、移液器和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體20mL×1瓶，4℃保存。
標(biāo)準(zhǔn)品：液體1mL×1瓶，5 mg/mL，4℃保存。
樣品中可溶性蛋白質(zhì)提取：
液體樣品：澄清無(wú)色液體樣品可以直接測(cè)定。
組織樣品：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液（自備，根據(jù)需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水））
冰浴勻漿，8000g，4℃離心10min，取上清，即待測(cè)液。（動(dòng)物樣品常常需要稀釋）
細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。
測(cè)定操作：
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到540 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 空白管：取0.5mL EP管，加入40μL蒸餾水，200μL試劑一，混勻后室溫靜置15 min，取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板，540nm比色，記為A空白管。
3. 標(biāo)準(zhǔn)管：取0.5mL EP管，加入40μL標(biāo)準(zhǔn)液，200μL試劑一，混勻后室溫靜置15 min，取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板，540 nm比色，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。
4. 測(cè)定管：取0.5mL EP管，加入40μL待測(cè)液，200μL試劑一，混勻后室溫靜置15 min，取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板，540nm比色，記為A測(cè)定管。
注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。
樣品中蛋白質(zhì)濃度計(jì)算公式：
C待測(cè)（mg/mL）= C標(biāo)準(zhǔn)管×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)
=5×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)
注意事項(xiàng)：
1.樣品蛋白濃度須在1～10mg/ml范圍內(nèi)，低于1mg/ml不能用此法，高于10mg/ml須做相應(yīng)稀釋。因此測(cè)定前用1～2個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn)，確保蛋白濃度在1～10mg/ml范圍內(nèi)。
2.待測(cè)樣品蛋白提取可用生理鹽水、雙蒸水或不含蛋白的PBS提取。該法受硫酸銨、Tris緩沖液干擾，提取液中應(yīng)不含這些物質(zhì)；否則改用BCA蛋白質(zhì)含量測(cè)定試劑盒。
上海牧榮生物科技有限公司
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