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詳細介紹
| 品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現貨 |
|---|---|---|---|
| 應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業,農林牧漁,制藥/生物制藥 |
己糖激酶（HK）測試盒
微量法 100管/96樣
正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義
HK（EC 2.7.1.1）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，是葡萄糖分解過程中的第一個關鍵酶，催化葡萄糖轉化為6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖是糖酵解和磷酸戊糖途徑的交叉點。
測定原理
HK催化葡萄糖合成6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脫氫酶進一步催化6-磷酸葡萄糖脫氫生成NADPH，NADPH在340nm有特征吸收峰。
需自備的儀器和用品
紫外分光光度計/酶標儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制
提取液：100mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體20mL×1瓶， 4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存；
試劑三：粉劑×1支，-20℃保存；
樣本的前處理
1、細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
3、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟
分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節波長至340nm，蒸餾水調零。
樣本測定
（1）在試劑二中加入18mL試劑一充分溶解，置于37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴5min；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
（2）在試劑三中加入1mL試劑一，充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
（3）在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本、10μL試劑三和180μL試劑二，混勻，立即記錄340nm處20s時的吸光值A1和 5min20s后的吸光值A2，計算ΔA=A2-A1。
注意：不同勻漿組織中HK活力不一樣，做正式試驗之前請做1-2只預試，若ΔA>0.5，則說明組織活力太高，必須用提取液稀釋成適當濃度勻漿上清液（計算公式中乘以相應稀釋倍數），或縮短反應時間至2min,使ΔA<0.5，以提高檢測靈敏度。
HK活性計算
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、血清（漿）HK活性
單位的定義：每毫升血清（漿）在每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
HK（nmol/min/mL）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=643×ΔA
2、組織、細菌或細胞中HK活性
（1）按樣本蛋白濃度計算
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
HK（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
HK（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=643×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
HK（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=1.286×ΔA
V反總：反應體系總體積，2×10-4 L；ε：NADPH摩爾消光系數，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.01 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500萬。
b.用96孔板測定的計算公式如下
1、血清（漿）HK活性
單位的定義：每毫升血清（漿）在每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
HK（nmol/min/mL）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=1286×ΔA
2、組織、細菌或細胞中HK活性
（1）按樣本蛋白濃度計算
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
HK（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=1286×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
HK（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=1286×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
HK（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總)÷T=2.572×ΔA
V反總：反應體系總體積，2×10-4 L；ε：NADPH摩爾消光系數，6.22×103 L / mol /cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V樣：加入樣本體積，0.01 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500萬。
上海牧榮生物科技有限公司
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