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簡要描述：羥甲基戊二酰輔酶A合成酶（HMGCS）測試盒 上海牧榮生物科技有限公司專業(yè)實驗室產(chǎn)品.為客戶全面解決實驗、生產(chǎn)、開發(fā)需求,提供方便、快捷的服務。
產(chǎn)品型號：廠商性質(zhì)：代理商更新時間：2024-05-08訪 問 量：669詳細介紹
| 品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
|---|---|---|---|
| 應用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥 |
羥甲基戊二酰輔酶A合成酶（HMGCS）測試盒
微量法 100管/96樣
正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義
羥甲基戊二酰輔酶A合成酶是甲羥戊酸代謝途徑中的關(guān)鍵酶，催化乙酰CoA與乙酰乙酰CoA生成羥甲基戊二酰CoA。
測定原理
HMGCS催化乙酰CoA與乙酰乙酰CoA生成羥甲基戊二酰CoA，同時產(chǎn)生CoASH，使DTNB轉(zhuǎn)化為黃色的TNB，在412nm下有特征吸光值。
所需的儀器和用品
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制
提取液：100mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：粉劑×1瓶，-20℃避光保存；臨用前加入3mL蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融；
試劑二：粉劑×1瓶，-20℃避光保存；臨用前加入3mL蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融；
試劑三：6mL×1瓶，4℃避光保存。
樣本測定的準備
1、細菌、細胞或組織樣品的制備：
細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟
分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至412nm，蒸餾水調(diào)零。
在微量石英比色皿或96孔板中加入25μL試劑一、25μL試劑二和50μL試劑三，混勻，加入100μL樣本上清，迅速混勻后記錄412nm下初始吸光值A(chǔ)1和4min后的吸光值A(chǔ)2。計算ΔA＝A2-A1。
HMGCS活性計算
用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、血清（漿）活性
單位定義：每mL血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生1nmolTNB為一個酶活力單位。
HMGCS（nmol/min /mL）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣 ÷T=36.76×ΔA
2、組織、細菌或細胞HMGCS活性
(1) 按樣本蛋白濃度計算
單位定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmolTNB為一個酶活力單位。
HMGCS（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=36.76×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
單位定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmolTNB為一個酶活力單位。
HMGCS（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（W ×V樣÷V樣總）÷T=36.76×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算
單位定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmolTNB為一個酶活力單位。
HMGCS（nmol/min /104 cel）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（500×V樣÷V樣總）÷T=0.074×ΔA
V反總：反應體系總體積，2×10-4 L；ε：TNB摩爾消光系數(shù)，1.36×104 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.1 mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應時間，4 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細胞或細菌總數(shù)，500萬。
用96孔板測定的計算公式如下
1、血清（漿）活性
單位定義：每mL血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生1nmolTNB為一個酶活力單位。
HMGCS（nmol/min /mL）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣 ÷T=73.53×ΔA
2、組織、細菌或細胞HMGCS活性
(1) 按樣本蛋白濃度計算
單位定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmolTNB為一個酶活力單位。
HMGCS（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=73.53×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
單位定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmolTNB為一個酶活力單位。
HMGCS（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（W ×V樣÷V樣總）÷T=73.53×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算
單位定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmolTNB為一個酶活力單位。
HMGCS（nmol/min /104 cel）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（500×V樣÷V樣總）÷T=0.147×ΔA
V反總：反應體系總體積，2×10-4 L；ε：TNB摩爾消光系數(shù)，1.36×104 L / mol /cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V樣：加入樣本體積，0.1 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，4 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細胞或細菌總數(shù)，500萬。
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