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詳細介紹
| 品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現貨 |
|---|---|---|---|
| 應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業,農林牧漁,制藥/生物制藥 |
葡萄糖氧化酶（GOD）測試盒
微量法 100管/48樣
正式測定前取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義
GOD（EC 1.1.3.4）廣泛存在于動物、和植物中，催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸，并產生H2O2，是生物體中產生活性氧的代謝途徑之一。
測定原理
GOD催化產生H2O2，過氧化物酶催化H2O2氧化4-氨基安替比林偶聯酚，生成有色化合物，在500 nm有特征吸收峰，顏色深淺與GOD活性成線性關系。
試驗中所需的儀器和設備
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、蒸餾水
試劑的組成和配制
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存；
緩沖液：液體30mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入10mL緩沖液充分溶解待用；用不完的試劑4℃保存一個月；
試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入10mL緩沖液充分溶解待用；用不完的試劑4℃保存一個月；
樣品測定的準備
1、細菌、細胞或組織樣品的制備：
細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟
分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節波長至500nm，蒸餾水調零。
試劑一和試劑二的配制：參見試劑的組成和配制。
3、煮沸樣本的準備：取200μL樣本至新的EP管中，95℃水浴10min，冷卻至室溫后，8000g 4℃離心10min，取上清作為對照管的煮沸樣本待測。
4、測定操作表
試劑（μL） | 對照管 | 測定管 |
樣本 | 50 | |
煮沸樣本 | 50 | |
試劑一 | 75 | 75 |
試劑二 | 75 | 75 |
混勻，35'C保溫15min后，于500nm波長處讀取吸光度。ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管需設一個對照管。
GOD活力單位的計算
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
回歸方程為y = 2.8348x - 0.0169；x為H2O2標準品濃度（μmol/mL），y為ΔA。
1、血清（漿）GOD活力的計算
單位定義：每mL血清（漿）每分鐘催化產生1nmol H2O2為一個酶活力單位。
GOD（nmol/min/mL）= (ΔA+0.0169) ÷2.8348×V反總÷V樣÷T×1000=58.8×(ΔA+0.0169)
2、細菌、細胞或組織GOD活力的計算
（1）按蛋白濃度計算
單位定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產生1nmol H2O2為一個酶活力單位。
GOD（nmol/min/mg prot）=(ΔA+0.0169) ÷2.8348×V反總÷(V樣×Cpr) ×1000÷T
=58.8×(ΔA+0.0169)÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
單位定義：每g組織每分鐘催化產生1nmol H2O2為一個酶活力單位。
GOD（nmol/min/g鮮重）=(ΔA+0.0169) ÷2.8348×V反總÷(W×V樣÷V樣總) ×1000÷T
=58.8×(ΔA+0.0169)÷W
（3）按細菌或細胞密度計算
單位定義：每一萬個細菌或細胞每分鐘催化產生1nmol H2O2為一個酶活力單位。
GOD（nmol/min/104 cell）=(ΔA+0.0169) ÷2.8348×V反總÷(500×V樣÷V樣總) ×1000÷T
=0.118×(ΔA+0.0169)
V反總：反應體系總體積，0.125mL； V樣：加入樣本體積，0.05mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，15 min； Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500萬。
b.用96孔板測定的計算公式如下
回歸方程為y = 1.4174x - 0.0169；x為H2O2標準品濃度（μmol/mL），y為ΔA。
1、血清（漿）GOD活力的計算
單位定義：每mL血清（漿）每分鐘催化產生1nmol H2O2為一個酶活力單位。
GOD（nmol/min/mL）= (ΔA+0.0169) ÷1.4174×V反總÷V樣÷T×1000=118×(ΔA+0.0169)
2、細菌、細胞或組織GOD活力的計算
（1）按蛋白濃度計算
單位定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產生1nmol H2O2為一個酶活力單位。
GOD（nmol/min/mg prot）=(ΔA+0.0169) ÷1.4174×V反總÷(V樣×Cpr) ×1000÷T
=118×(ΔA+0.0169)÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
單位定義：每g組織每分鐘催化產生1nmol H2O2為一個酶活力單位。
GOD（nmol/min/g鮮重）=(ΔA+0.0169) ÷1.4174×V反總÷(W×V樣÷V樣總) ×1000÷T
=118×(ΔA+0.0169)÷W
（3）按細菌或細胞密度計算
單位定義：每一萬個細菌或細胞每分鐘催化產生1nmol H2O2為一個酶活力單位。
GOD（nmol/min/104 cell）=(ΔA+0.0169) ÷1.4174×V反總÷(500×V樣÷V樣總) ×1000÷T
=0.235×(ΔA+0.0169)
V反總：反應體系總體積，0.125mL； V樣：加入樣本體積，0.05mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，15 min； Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500萬。
上海牧榮生物科技有限公司
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