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| 品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現貨 |
|---|---|---|---|
| 應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業,農林牧漁,制藥/生物制藥 |
總巰基測試盒
微量法100T/48S
注意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
生物體內巰基主要包括谷胱甘肽巰基和蛋白質巰基。前者不僅能夠修復氧化損傷的蛋白質，而且參與活性氧清除，后者對于維持蛋白質構象具有重要作用。通過測定總巰基含量和GSH含量，能夠間接測定蛋白質巰基含量。
測定原理：
巰基基團與5,5’-二硫代-雙-硝基苯甲酸（DTNB）反應，生成黃色化合物，在412nm處有最大吸收峰。
自備實驗用品：
天平、研缽、恒溫水浴鍋、酶標儀、96孔板、乙醇和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體18mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體1mL×1管，4℃避光保存。
樣品的制備：
按照組織質量（g）：水體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL蒸餾水）進行冰浴勻漿，然后8000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
血清，培養液：稀釋5倍后測定，可取0.1mL樣本，加入0.4mL蒸餾水，混勻，置冰上待測。
操作步驟：
酶標儀預熱30min，調節波長至412nm。
操作表
在96孔板中加入如下試劑
對照管 | 測定管 | |
樣品（μL） | 40 | 40 |
試劑一（μL） | 150 | 150 |
試劑二（μL） | 10 | |
乙醇（μL） | 10 | |
混勻，25℃靜置10min，測定412nm吸光值。ΔA=A測定-A對照。每個測定管設一個對照管。 | ||
計算公式：
總巰基標準曲線：y = 1.8111x - 0.0037，R2 = 1，x為標品濃度，單位μmol/mL，y為吸光度ΔA。
1. 組織：
（1）按樣本重量計算
總巰基含量（μmol/g 鮮重）=（ΔA+0.0037）÷1.8111×V樣總÷W
=0.552×（ΔA+0.0037）÷W
（2）按樣本蛋白濃度計算
總巰基含量（μmol/mg prot）=（ΔA+0.0037）÷1.8111×V樣總÷Cpr
=0.552×（ΔA+0.0037）÷Cpr
2. 血清、培養液：
總巰基含量（μmol/L）=（ΔA+0.0037）÷1.8111×5×103
=2761×（ΔA+0.0037）
V樣總：加入提取液體積，1mL；W：樣品質量，g ；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；5：血清，培養液等液體樣本稀釋倍數；103 ：1mmol/ L=103μmol/ L
注意事項
*低檢出限為10μmol/L。
上海牧榮生物科技有限公司
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