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詳細介紹
| 品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現貨 |
|---|---|---|---|
| 應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業,農林牧漁,制藥/生物制藥 |
胞漿異檸檬酸脫氫酶（ICDHc）測試盒
微量法 100管/96樣
正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
ICDHc（EC 1.1.1.42）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，催化異檸檬酸脫氫脫羧生成 α-酮戊二酸，同時還原NADP+生成NADPH。ICDHc是細胞質中除了磷酸戊糖途徑外又一種NADPH重要來源，在逆境中該酶活性通常會發生顯著變化。
測定原理：
利用ICDHc催化NADP+還原成NADPH反應，在340 nm下測定NADPH濃度的增加。
所需的儀器和用品:
紫外分光光度計/酶標儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體19 mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存；
試劑三：粉劑×1瓶，-20℃保存；
樣本的前處理：
1、細菌、細胞或組織樣品的制備：
細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟：
分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節波長至340nm，蒸餾水調零。
將試劑二和試劑三轉移至試劑一中充分溶解；在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴10min以上；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
3、 在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本和190μL試劑一，混勻后立即記錄340nm處20s后吸光值A1和 2min20s后的吸光值A2，計算ΔA=A2-A1。
注意事項：
若A2-A1大于0.5，需將酶液用提取液稀釋，使A2-A1小于0.5，可提高檢測靈敏度。計算公式中乘以相應稀釋倍數。
若A2-A1小于0.005，可延長反應時間到5min或10min。
ICDHc活力單位的計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、血清（漿）ICDHc活力的計算:
單位的定義：每mL血清（漿）每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
ICDHc（nmol/min/mL）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=1608×ΔA
2、組織、細菌或細胞中ICDHc活力的計算:
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
ICDHc（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
ICDHc（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=1608×ΔA÷W
（3） 按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
ICDHc（nmol/min/104）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=3.216×ΔA
V反總：反應體系總體積，2×10-4 L；ε：NADPH摩爾消光系數，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.01 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，2 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500萬。
b.用96孔板測定的計算公式如下
1、血清（漿）ICDHc活力的計算：
單位的定義：每mL血清（漿）每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
ICDHc（nmol/min/mL）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=3216×ΔA
2、組織、細菌或細胞中ICDHc活力的計算：
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
ICDHc（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=3216×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
ICDHc（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=3216×ΔA÷W
（3） 按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
ICDHc（nmol/min/104）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=6.432×ΔA
V反總：反應體系總體積，2×10-4 L；ε：NADPH摩爾消光系數，6.22×103 L / mol /cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V樣：加入樣本體積，0.01 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，2 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500萬。
上海牧榮生物科技有限公司
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