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簡要描述：胰蛋白酶測試盒 上海牧榮生物科技有限公司專業(yè)實驗室產(chǎn)品.為客戶全面解決實驗、生產(chǎn)、開發(fā)需求,提供方便、快捷的服務(wù)。
產(chǎn)品型號：廠商性質(zhì)：代理商更新時間：2024-05-08訪 問 量：635詳細介紹
| 品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
|---|---|---|---|
| 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥 |
胰蛋白酶測試盒
微量法 100T/96S
注意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義：
胰蛋白酶選擇性水解變性蛋白質(zhì)中由賴氨酸或精氨酸的羧基所構(gòu)成的肽鏈，是一種重要的消化酶。此外，胰蛋白酶還廣泛應(yīng)用于膿胸、血胸、外科炎癥、潰瘍、創(chuàng)傷性損傷等所產(chǎn)生的局部水腫、血腫及膿腫等的輔助治療。
測定原理：
胰蛋白酶催化水解TAME的酯鍵，釋放出的游離羧基與反應(yīng)體系中的*發(fā)生中和反應(yīng)，導(dǎo)致溶液的pH值降低，以苯酚紅為指示劑，測定溶液在555nm處吸收值的變化，可以快速測得胰蛋白酶活性數(shù)據(jù)。胰蛋白酶在一定范圍內(nèi)與555nm處吸收值的降低呈良好的線性關(guān)系。
自備儀器和用品：
酶標儀、96孔板、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制：
提取液：液體120 mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體5 mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體5 mL×1瓶，4℃避光保存。
試劑三：液體2 mL×1瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
組織樣品：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）冰浴勻漿，10000g，4℃離心10min，取上清，即粗酶液。
測定步驟：
1. 酶標儀預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長到555 nm。
2. 工作液的配制：臨用前根據(jù)用量按照試劑一（V）：試劑二（V）：蒸餾水（V）：試劑三（V）=1 mL：1 mL：5.4 mL：0.4 mL的比例充分混合。（注意：現(xiàn)用現(xiàn)配，用多少配多少，在空瓶中配制，試劑盒中帶有4個空瓶）
3. 吸取5μL樣本，加入195 μL工作液，混勻后立即測定，記錄555nm下1min時的吸光值A(chǔ)1和2min時的吸光值A(chǔ)2。計算△A=A1-A2
注意：如果△A小于0.005，可將反應(yīng)時間延長到5min。如果△A大于0.5，體系迅速變色，可將樣本用提取液稀釋后測定（建議稀釋10倍），計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
胰蛋白酶活性計算公式：
使用96孔板測定的計算公式如下
（1）按蛋白濃度計算
活性單位定義：室溫下每毫克蛋白質(zhì)每分鐘催化555nm處吸光值減少0.5為1個酶活單位。
胰蛋白酶（U/mg prot）= △A ×V反總 ÷（Cpr×V1）÷0.5÷T
=80×△A ÷Cpr
（2）按樣本質(zhì)量計算
活性單位定義：室溫每克組織每分鐘催化555nm處吸光值減少0.5為1個酶活單位。
胰蛋白酶（U/g 鮮重）= △A×V反總÷（W×V1÷V2）÷0.5÷T=80×△A ÷W
Cpr：粗酶液蛋白質(zhì)濃度（mg/mL），需要另外測定；W：組織質(zhì)量（g）；V1：加入反應(yīng)體系中粗酶液體積（mL），5 μL=0.005 mL；V2：粗酶液總體積（mL），1 mL；V反總：反應(yīng)總體積，0.2 mL；T：反應(yīng)時間（min），1 min。
上海牧榮生物科技有限公司
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